上海精宏真空干燥箱在大豆蛋白抗氧化活性肽的制备工艺研究中

1.1 主要试验材料
大豆粕:市售;大豆分离蛋白、亚油酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化亚铁、EDTA、KSCN、邻苯三酚、碱性蛋白酶(3万U/g)、中性蛋白酶(5万U/g)、木瓜蛋白酶(8万U/g)、复合风味蛋白酶(6万U/g):国药集团化学试剂有限公司;Tris:上海凌峰化学试剂有限公司
1.2 主要仪器设备
紫外可见分光光度计(754):上海菁华科技仪器有限公司;数显恒温水浴锅(HH-4):上海森地科学仪器有限公司;离心机(TDL-5):上海安亭科学仪器厂;真空干燥系统(DZF-6090):上海精宏设备有限公司
1.3 试验方法
1.3.1 水分含量的测定:常压烘箱干燥法[3];蛋白质含量的测定:全量凯氏定氮法[3]。
1.3.2 豆粕中粗蛋白的提取
碱提酸沉法:称取一定量豆粕,按一定比例加水后恒温水浴浸泡并不断搅拌使之充分溶胀一段时间后,调pH**碱性,3 000 r/min离心10 min,将上清液调pH到4.5,再在3 000 r/min离心15 min,取沉淀进行真空干燥即得大豆蛋白粉。蛋白质提取率(%)=(提取大豆蛋白粉质量/豆粕中蛋白质质量)×100[4] (1)
1.3.3 大豆蛋白肽的制备
将上述自制大豆蛋白粉溶解于蒸馏水中,80℃加热溶胀10 min后置于恒温水浴锅中,温度降**酶的**适温度,再用1.0 mol/L NaOH调pH到**适值,加入已活化的蛋白酶,在搅拌下恒温水解一定时间(反应过程中不断加入NaOH标准溶液以保持反应体系pH值不变),迅速升温**90~100℃保持10 min进行灭酶,冷却后3 000 r/min离心15 min,取上清液供抗氧化活性测定之用[5]。
1.3.4 抗氧化活性的测定
改进的亚油酸-硫氢酸钾法。在10 mL具塞试管中加入0.2 mol/L(pH7.0)的磷酸盐缓冲液1.5 mL,加入大豆蛋白水解液100 μL,浓度为50 mmol/L亚油酸的乙醇溶液(体积分数95%)100 μL和浓度为25 mmoL/L的FeC12-EDTA溶液50 μL,盖上玻璃塞在50℃,100r/min的恒温摇床上反应3 h。取上述混合液200 μL,加入体积分数为75%乙醇6 mL,浓度为0.2 mol/L氯化亚铁溶液200 μL,质量分数为30%的KSCN 200 μL。混合均匀后反应5 min,在480 nm下测定吸光度值,以空白吸光度A0为对照,加大豆蛋白肽液的吸光度为As,则被测物的过氧化抑制率(抗氧化活力)为AA。过氧化抑制率AA(%)=[(A0-AS)/A0][6]