微生物常见生化培养基

硝酸盐培养基
硝酸钾   0.2g
蛋白     5g
蒸馏水   1000ml
PH       7.4
制法:溶解,校正PH,分装试管,每管约5ml,121℃高压灭菌15min。
硝酸盐还原试剂
甲液:将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
乙液:将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
试验方法
  接种后在36±1℃培养1~4d, 加入甲液和乙液各一滴,观察结果。硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色。 
  注:本试验阴性的原因有三:细菌不能还原硝酸盐;亚硝酸盐继续分解,生成氨和氮;培养基不适于细菌的生长。如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解,可再加入锌粉少许,可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。
氧化酶
1%盐酸二甲基对苯二胺溶液:少量新鲜配制,干燥冰箱内避光保存。
1%α—萘酚—乙醇溶液。
试验方法
取白色洁净滤纸沾取菌落。加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈现粉红色,并逐渐加深;再加α-萘酚溶液一滴,阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色。阴性于两分钟内不变色。
   以毛细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上,其显色反应与以上相同。
淀粉水解(生化试验培养基,用于产乳酸的链球箘的鉴定)
蛋白胨          10g
NaCl            5g
牛肉膏          5g
可溶性淀粉      2g
蒸馏水          1000mL
琼脂            15~20g
121℃灭菌20min
(PH7.6肉浸汤琼脂 90mL
羊血清5mL
3%淀粉溶液 10mL
普通肉汤  100mL
葡萄糖    0.2g
PH值7.5~7.7
用法:将肉汤液琼脂121℃高压灭菌15分钟,冷**50℃时,以无菌操作加入灭菌的淀粉溶液及无菌羊血清混合后,倾注灭菌平板备用。
明胶培养基(蛋白胨和牛肉膏提供氮源、维生素、矿物质;某些含明胶的细菌水解明胶,使其液化而降低明胶的胶凝作用)
蛋白胨     5g
牛肉膏      3g
明胶        120g
蒸馏水      1000mL
制法:将上述成分混合,置流动蒸汽灭菌器内,加热溶解,校正PH**7.2~7.4,用绒布过滤。分装试管,121℃灭菌15min,备用)
用法:1.用接种针穿刺接种
2.将试管置于35~37℃培养24h。
     3将接种物放于2~8℃约10~30min,待降温后取出观察,如仍呈溶解状时即为明胶液化试验阳性,如凝固不溶者为阴性。
尿素琼脂(蛋白胨提供氮源,满足细菌生长需要,氯化钠维持稳定的渗透压,葡萄糖为可发酵糖,磷酸二氢钾作为缓冲剂,酚红是指示剂,琼脂为凝固剂。用于细菌脲酶检测)
蛋白胨        1g
氯化钠        5g
葡萄糖        1g
磷酸二氢钾    2g
0.4%酚红溶液  3mL(酚红  0.012g)
琼脂          20g
蒸馏水        1000mL
20%尿素溶液  100mL(尿素  20g)
pH6.6~7.0
制法: 在蒸馏水或去离子水100mL中,加入上述所有成分(琼脂除外),混合均匀,过滤灭菌。将琼脂加入900mL蒸馏水或去离子水中,121℃灭菌15min,冷却**50℃,加入灭菌好的基本培养基,混匀后,分装于灭菌试管内,放成斜面备用.
试验方法:挑取琼脂培养物接种,在36±1℃培养24h,观察结果.尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。
三糖铁琼脂(TSI)(适合于肠杆菌科的鉴定。)
原理:用于观察细菌对糖的利用和硫化氢(变黑)的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1,只能利用葡萄糖的细菌,葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄,但因量少,生成的少量酸,因接触空气而氧化,加之细菌利用培养基中含氮物质,生成碱性产物,故使斜面后来又变红,底部由于是在厌氧状态下,酸类不被氧化,所以仍保持黄色。  而发酵乳糖的细菌(e.coli),则产生大量的酸,使整个培养基呈现黄色。  如培养基接种后产生黑色沉淀,是因为某些细菌能分解含硫氨基酸,生成硫化氢,硫化氢和培养基中的铁盐反应,生成黑色的硫化亚铁沉淀。
蛋白胨             20g
牛肉膏             5g
乳糖               10g
蔗糖               10g
葡萄糖             1g
氯化钠             5g
硫酸亚铁铵〔Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O〕 0.2g
硫代硫酸钠         0.2g
琼脂               12g
酚红               0.025g
蒸馏水             1000mL
pH7.4
制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH.加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂.加入0.2%酚红水溶液12.5mL,摇匀.分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层.121℃高压灭菌15min.放置高层斜面备用.。
触媒(又称过氧化氢酶,具有过氧化氢酶的细菌,能催化过氧化氢成为水和原子态氧,继而形成氧气分子,出现气泡。用于链球菌即革兰氏阳性球菌初步分群)
用法:(1)玻片法:取18~24h培养物,置于清洁玻片上,家一滴3%过氧化氢溶液,如产生大量气泡为阳性。
(2)试管法:取琼脂斜面(不含血液的)18~24h培养物,接种于试管内,加入3%过氧化氢溶液1mL,如产生大量气泡为阳性。
注意事项:①3%过氧化氢溶液要新鲜配制。
          ②不宜用血琼脂平板上生长的菌落,因红细胞含有触媒,可致假阳性反应。
          ③取对数生长期的细菌。
Hugh-Leifson培养基(O/F试验用)
蛋白胨                      2g
氯化钠                      5g
磷酸氢二钾                  0.3g
琼脂                        4g
葡萄糖                      10g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液        12mL
蒸馏水                      1000mL
pH7.2
制法:将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正pH**7.2.加入葡萄糖,琼脂煮沸,溶化琼脂,然后加入指示剂.混匀后,分装试管,121℃高压灭菌15min,直立凝固备用.
试验方法:从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种,同时接种两支培养基,其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面,高度约1cm,于36±1℃培养.
蛋白胨水(靛基质试验用)
蛋白胨(或胰蛋白胨)       20g
氯化钠                  5g
蒸馏水                  1000mL
pH7.4
制法:按上述成分配制,分装小试管,121℃高压灭菌15min.
靛基质试剂
柯凡克试剂:将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中.然后缓慢加入浓盐酸25mL.
欧-波试剂:将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内.然后缓慢加入浓盐酸20mL.
试验方法:挑取小量培养物接种,在36±1℃培养1~2d,必要时可培养4~5d.加入柯凡克试剂约0.5mL,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;或加入欧-波试剂约0.5mL,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色.
注:蛋白胨中应含有丰富的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用.
β—半乳糖苷酶试验(ONPG)(用于迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴定)
原理:有β—半乳糖苷酶的细菌,可以分解邻硝基酚β—半乳糖苷(ONPG),而释放黄色的邻硝基酚。
方法:取新鲜细菌一环,加入到0.25mL的无菌生理盐水中,加甲苯一滴充分振动,37℃,5min,再加入无色ONPG溶液0.25mL置于37℃水浴,悬液变黄则为阳性。
七叶苷水解试验(主要用于D群链球菌与其他链球菌的鉴别)
原理:七叶苷可以被细菌分解为葡萄糖和七叶素,七叶素与培养基中的二价铁反应,形成黑色化合物,使培养基变黑。
方法:将待检测菌接种于七叶苷培养基上,培养后观察结果。
鼠李糖培养基
蛋白胨                    2.7g
氯化钠                    5.0g
磷酸氢二钾                0.3g
1%溴麝香草酚蓝水溶液     3.0mL
琼脂                      5.0g
蒸馏水                    1000mL
制法:(1)除指示剂外将上述成分混于蒸馏水,并加热融化琼脂。调PH7.0后,加入指示剂,做成基础培养基。
     (2)按0.5~1%量称取不同的糖(醇),每种分别加入15mL蒸馏水,调PH**7.0
     (3)根据制作培养基的量,加如上述基础培养基,**后分装小试管,20分钟灭菌,置斜面。
注意事项: 苦杏仁甙按0.2~0.3%量加入。阿拉伯糖需间歇三次灭菌,或过滤除菌。